淋巴細(xì)胞分離液為Ficoll、羥乙基淀粉550與泛影酸葡甲胺的混合液。抗凝外周血可在分離液中分層。離心時(shí)，在Ficoll、羥乙基淀粉的作用下紅細(xì)胞與粒細(xì)胞聚集并迅速沉降；此時(shí)，淋巴細(xì)胞及其他單個(gè)核細(xì)胞仍處于分離液上層，紅細(xì)胞污染可忽略不計(jì)。大部分血小板可在細(xì)胞清洗低速離心過(guò)程中去除。 其他人及動(dòng)物多種比重細(xì)胞分離液，因不同種屬不同比重分離液的細(xì)胞離散系數(shù)及細(xì)胞帶電不同，用戶在制定分離液時(shí)應(yīng)提供所需分離液的比重、動(dòng)物種屬及被分離細(xì)胞的名稱。
1. 輕輕顛倒瓶子使LSM充分混合
2. 無(wú)菌轉(zhuǎn)移3 mlLSM到15 ml離心管中。
3. 混合2 ml除纖維蛋白血液或肝素處理血液 和2 ml 生理鹽水。
4. 仔細(xì)的將稀釋血液加入3 mlLSM（室溫）于15ml離心管中，在血液和LSM中形成一個(gè)明顯的分層。不要將稀釋血液混合入LSM中。
5. 室溫下400g離心15-30分鐘，離心可以沉淀紅細(xì)胞和多核白細(xì)胞同時(shí)可以再LSM上形成一層單核淋巴細(xì)胞，如上圖所示。
6. 吸出淋巴細(xì)胞上方2-3mm的血漿。
7. 吸取淋巴細(xì)胞層以及它下面一半的LSM和轉(zhuǎn)移到另外的一個(gè)離心管。加入等體積的平衡鹽緩沖液淋巴細(xì)胞離心管中，室溫離心10分鐘，離心速度設(shè)定在既不損傷細(xì)胞又能沉淀細(xì)胞即刻，例如160 - 260 x g（去除LSM和降低血小板的百分比）。
8. 用平衡鹽緩沖液清洗細(xì)胞，用適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基重懸細(xì)胞。
