雙抗體夾心法是將含有已知抗體的抗血清吸附在微量滴定板上的小孔里，洗滌一次；加待測抗原，如兩者是特異的，則發(fā)生結(jié)合，然后把多余抗體洗除；加入與待測抗原呈特異反應(yīng)的酶聯(lián)抗體，使形成“夾心”；加入該酶的底物，若看到有色的酶解產(chǎn)物產(chǎn)生，說明在孔壁上存在相應(yīng)的抗原。 酶聯(lián)免疫吸附試驗( ELISA )原理是一種將抗原抗體反應(yīng)的特異性和酶促反應(yīng)的高效催化作用結(jié)合起來的方法。基本原理:先將抗體或抗原包被到固相載體表面，然后與待測樣品中的抗原或抗體發(fā)生反應(yīng)，再加入酶標(biāo)抗體與載體表面的抗原抗體復(fù)合物結(jié)合，后加入酶底物系統(tǒng)進(jìn)行顯色，根據(jù)顏色深淺或光密度(OD)值的大小進(jìn)行定性或定量分析，從而得出待測標(biāo)本中抗原或抗體的含量。常用方法有雙抗體夾心法常用于測抗原間接法常用于測抗體本試驗以雙抗體夾心法原理檢測AFP，以協(xié)助原發(fā)性肝癌的早期診斷。
索萊寶Human IL-6 elisa試劑盒采用基于雙抗體夾心法的酶聯(lián)免疫吸附檢測技術(shù)。試劑盒的檢測原理如下：
1.將抗人 IL-6 單克 隆抗體包被在酶標(biāo)板上；2.分別加入梯度稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品和預(yù)稀釋的樣本，標(biāo)準(zhǔn)品和樣本中的人 IL-6 會與酶標(biāo) 板上的包被抗體充分結(jié)合；3.洗板后加入生物素化抗人 IL-6 抗體，該抗體會與板子上包被抗體捕獲的標(biāo)準(zhǔn)品 和樣本中的人 IL-6 發(fā)生特異性結(jié)合；4.洗板后加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的鏈霉親和素，生物素與鏈 霉親和素會發(fā)生高強度的非共價結(jié)合；5.洗板后加入顯色劑底物 TMB，若反應(yīng)孔中樣品存在不同濃度的人 IL-6， 則 HRP 會使無色 TMB 變成不同深淺（正相關(guān)）的藍(lán)色物質(zhì)，加入終止液后反應(yīng)孔會變成黃色；后，在 λmax=450 nm（OD=450 nm）處測定反應(yīng)孔樣品吸光度（OD），樣本中的人 IL-6 濃度與 OD 成正比，通過 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線和四參數(shù)擬合軟件便可計算出樣本中人 IL-6 的濃度。
