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elisa試劑盒測(cè)定值與文獻(xiàn)中相差太大怎么辦?
  elisa試劑盒測(cè)定值與文獻(xiàn)中相差太大怎么辦?
 
  (1)、生化測(cè)定主要目的是比較處理內(nèi)和處理間該指標(biāo)的變化。同時(shí),要測(cè)定絕對(duì)值,往往是很可能甚至不可能的。因此,追求的不是絕對(duì)值而是相對(duì)值。
 
  (2)、用不同測(cè)定方法和不同測(cè)定條件下得到的測(cè)定值可能存在很大差異。因此,如果測(cè)定方法不同,同一樣品的測(cè)定值通常是不可以直接比較的。這也是建議使用試劑盒測(cè)定的理由之一。因?yàn)椴煌髡哂猛辉噭┖袦y(cè)定的數(shù)據(jù)才是可以相互比較的。
 
  (3)、同一種材料,不同處理、不同發(fā)育狀態(tài)和不同器官其生化指標(biāo)可能發(fā)生很大變化。因此,能夠直接用來比較的文獻(xiàn)資料本來就不多。
 
  (4)、當(dāng)然,話說回來,測(cè)定值如果與文獻(xiàn)報(bào)道相差太大,首先應(yīng)該檢查單位是否一致,包括摩爾還是毫摩爾,是干重、鮮重還是蛋白質(zhì)濃度,是分鐘還是秒,等等。其次,檢查計(jì)算是否有誤?最后,如果相差不是數(shù)量級(jí),通常是很正常的。
 
  elisa試劑盒反應(yīng)五要素有哪些?
 
  (1)、引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無明顯同源性。
 
  (2)、引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
 
  (3)、避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),ELISA試劑盒避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
 
  (4)、引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
 
  (5)、引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第er個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
 
  (6)、引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), ELISA試劑盒被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn), 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
 
  (7)、引物長(zhǎng)度: 15-30bp,常用為20bp左右。

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