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丙酮酸測(cè)定試劑盒是怎么測(cè)得丙酮酸的值?
丙酮酸是生物代謝及物質(zhì)轉(zhuǎn)化的重要中間體,可通過乙醛CoA和三羧酸循環(huán)實(shí)現(xiàn)體內(nèi)糖、脂肪和氨基酸間的相互轉(zhuǎn)化,在營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)代謝過程中起著重要的樞紐作用。丙酮酸鹽檢測(cè)試劑盒提供了一種簡(jiǎn)單、直接和可自動(dòng)化操作的程序來測(cè)量不同生物學(xué)標(biāo)本中丙酮酸的含量。

丙酮酸測(cè)定試劑盒的測(cè)定步驟:

1、 分光光度計(jì)預(yù)熱30min 以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至520nm,蒸餾水調(diào)零。

2、取300μ樣本+100μ試劑一于1.5mL EP 管中,混勻,靜置2min,加入500μ試劑二,混勻,于520nm波長(zhǎng)處測(cè)定管吸光值A。

丙酮酸的計(jì)算方法:

1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定回歸方程為y = 0.0466x + 0.0675; x 為丙酮酸含量(µg/mL),為吸光值。

2、按照血清(漿)體積計(jì)算

丙酮酸含量(μg/mL= [(A-0.0675)÷0.0466×V1]÷(V3×V1÷V2=214.6×(A-0.0675)

3、按照蛋白濃度計(jì)算

丙酮酸含量(μg/mg prot=[(A-0.0675)÷0.0466×V1]÷(V1×Cpr)=21.46×(A-0.0675) ÷Cpr

4、按照樣品質(zhì)量計(jì)算

丙酮酸含量(µg/g 鮮重)= [(A-0.0675)÷0.0466×V1]÷(W ×V1÷V2=21.46×(A-0.0675) ÷W

5、按照細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算

丙酮酸含量(μg/104 cell)=[(A-0.0675)÷0.0466×V1]÷(500×V1÷V2=0.043×(A-0.0675)

V1:加入反應(yīng)體系中樣本體積,0.3mLV2:加入提取液體積,1 mL;V3:加入血清(漿)體積,0.1 mL;

Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),500 萬。

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