Cell Counting Kit-8 簡(jiǎn)稱CCK-8試劑盒，為MTT法的替代方法，是一種基于WST（水溶性四唑鹽，化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽）的廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速高靈敏度檢測(cè)試劑盒?？捎糜谒幬锖Y選、細(xì)胞增殖測(cè)定、細(xì)胞毒性測(cè)定、腫瘤藥敏等試驗(yàn)。
活力計(jì)算：.
細(xì)胞活力（％）=[A(加藥)－A(空白)]／[ A(0加藥)－A(空白)]×100
A（加藥）：具有細(xì)胞、CCK-8溶液和藥物溶液的孔的吸光度
A（空白）：具有培養(yǎng)基和CCK-8溶液而沒(méi)有細(xì)胞的孔的吸光度
A（0 加藥）：具有細(xì)胞、CCK-8溶液而沒(méi)有藥物溶液的孔的吸光度
細(xì)胞活力：細(xì)胞增殖活力或細(xì)胞毒性活力
注意事項(xiàng)：
①建議先做幾個(gè)孔摸索接種細(xì)胞的數(shù)量和加入CCK-8試劑后的培養(yǎng)時(shí)間。
②白細(xì)胞可能需要培養(yǎng)較長(zhǎng)時(shí)間。
③當(dāng)使用標(biāo)準(zhǔn)96 孔板時(shí)，貼壁細(xì)胞的最小接種量至少為1 ,000個(gè)/孔 (100 μL培養(yǎng)基)。檢測(cè)白細(xì)胞時(shí)的靈敏度相對(duì)較低，因此推薦接種量不低于2,500 個(gè)/孔 ( 100 μL培養(yǎng)基)。如果要使用24孔板或6孔板實(shí)驗(yàn)，請(qǐng)先計(jì)算每孔相應(yīng)的接種量，并按照每孔培養(yǎng)基總體積的10% 加入CCK-8溶液。
④如果沒(méi)有450nm的濾光片，可以使用吸光度在430-490 nm 之間的濾光片，但是450nm檢測(cè)靈敏度最高。

⑤培養(yǎng)基中酚紅的吸光度可以在計(jì)算時(shí)，通過(guò)扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不會(huì)對(duì)檢測(cè)造成影響。

常見(jiàn)問(wèn)題：

1.一個(gè)孔中應(yīng)接種多少個(gè)細(xì)胞？

當(dāng)使用標(biāo)準(zhǔn)96孔板時(shí)，貼壁細(xì)胞的最小接種量至少為1,000 個(gè)/孔 (100 μl 培養(yǎng)基)。檢測(cè)白細(xì)胞時(shí)的靈敏度相對(duì)較低，因此推薦接種量不低于2,500 個(gè)/孔 (100 μl 培養(yǎng)基)。如果要使用24孔板或6孔板實(shí)驗(yàn)，請(qǐng)先計(jì)算每孔相應(yīng)的接種量，并按照每孔培養(yǎng)基總體積的10%加入CCK-8溶液。

2.能否用384孔板進(jìn)行試驗(yàn)？

可以。向各孔中加入培養(yǎng)基體積10%的CCK-8溶液，如果加入的CCK-8體積太少，可以先將CCK-8溶液稀釋1倍，然后加入培養(yǎng)基體積20%的量。

3.能否用24孔板進(jìn)行試驗(yàn)？

可以。向各孔中加入培養(yǎng)基體積10%的CCK-8溶液。

4.酚紅會(huì)影響檢測(cè)嗎？

不會(huì)。培養(yǎng)基中酚紅的吸光度可以在計(jì)算時(shí)，通過(guò)扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不會(huì)對(duì)檢測(cè)造成影響。

5.CCK-8與胸苷結(jié)合檢測(cè)之間是否有相關(guān)性？

有。然而，請(qǐng)注意由于CCK-8使用的檢測(cè)原理與胸苷檢測(cè)的不同，因此結(jié)果可能不同。

6.CCK-8能否檢測(cè)細(xì)菌細(xì)胞？

可以檢測(cè)E.coli，但不能檢測(cè)酵母細(xì)胞。向100 μl E.coli培養(yǎng)液中加入10 μl CCK-8溶液，并培養(yǎng)1-4個(gè)小時(shí)或過(guò)夜。

7.CCK-8穩(wěn)定嗎？

CCK-8在0-5℃下能夠保存至少6個(gè)月，在-20℃下避光可以保存1年。如果需要長(zhǎng)期保存，我們推薦-20℃的儲(chǔ)藏條件。

8.如果沒(méi)有450 nm的濾光片，還可以使用哪些其他濾光片？

還可使用450 nm到490 nm之間的濾光片。

9.如何減少由于CCK-8試劑在槍頭上或孔壁上的殘留所帶來(lái)的誤差？

可以在加樣前用培養(yǎng)基稀釋CCK-8試劑并混勻后加樣。

10.CCK-8是什么顏色？

應(yīng)該是粉紅色。若顏色不一樣，有可能會(huì)影響測(cè)定。

CCK-8試劑盒應(yīng)用非常廣泛，如藥物篩選、細(xì)胞增殖測(cè)定、細(xì)胞毒性測(cè)定、腫瘤藥敏試驗(yàn)以及生物因子的活性檢測(cè)等。