苯基-瓊脂糖凝膠H.P.是將苯基鍵合在瓊脂糖凝膠上形成的一種可利用疏水相互作用來實現(xiàn)目標(biāo)產(chǎn)品純化分離的疏水類介質(zhì)。用于生物大分子和乙肝疫苗的純化分離。

1外觀

本品為白色球狀凝膠,無嗅、無味、無肉眼可見雜質(zhì)。

2理化指標(biāo)

*柱子：內(nèi)徑16mm、柱長10cm，柱床高5cm，25℃，流動相為0.1mol/LNaCl。

3包裝

產(chǎn)品以無菌試劑瓶密封包裝，外貼標(biāo)簽，注明“品名、體積、顆粒大小、應(yīng)用、生產(chǎn)單位"等內(nèi)容。所選用的包裝應(yīng)有利于保證產(chǎn)品質(zhì)量、方便運輸和貯存。

4運輸

運輸中應(yīng)避免日曬、雨淋、重壓，嚴(yán)禁與有毒、有害物品混運。

5貯存

產(chǎn)品應(yīng)密封貯存在4℃~30℃（保存溶液為20% 乙醇+0.1M醋酸鈉），通風(fēng)、干燥、清潔的地方。不能冷凍。

用過的柱子貯存在4℃（20% 乙醇）。

6保質(zhì)期：

5年。

7應(yīng)用

苯基-瓊脂糖凝膠H.P.是一種疏水層析介質(zhì)，利用樣品中組分疏水性的不同進(jìn)行分離。用于生物大分子的純化分離。

下面簡要介紹介質(zhì)的使用過程。

7.1裝柱

（1）讓所有的材料和試劑達(dá)到室溫。配制初始緩沖液（平衡液）和洗脫緩沖液。

（2）根據(jù)柱子大小取所需量的凝膠，清洗掉20%乙醇，抽干，用初始緩沖液（按凝膠：緩沖液=3：1的比例）配成勻漿。

（3）將柱內(nèi)及柱子底端用水或緩沖液潤濕并保持一小段液位（液面略高于濾膜），務(wù)必使底端無氣泡。

（4）用玻璃棒引導(dǎo)勻漿沿著柱內(nèi)壁一次性倒入柱內(nèi)，注意勿使產(chǎn)生氣泡。打開柱子出液口，使凝膠在柱內(nèi)自由沉降，連結(jié)好柱子頂端柱頭。

（5）打開蠕動泵，讓緩沖液用使用時流速的1.33倍的流速流過，使柱床穩(wěn)定。用2~3倍柱體積的緩沖液平衡柱子。

7.2平衡

讓平衡緩沖液以一定流速流過柱子，到流出液電導(dǎo)和pH不變。平衡緩沖液一般是高鹽濃度的緩沖液，如0.02~0.05mol/L的PBS加1~2.5mol/L(NH₄)₂SO₄等。

7.3上樣

（1）樣品用平衡液配制，渾濁的樣品要離心和過濾后上樣。

（2）一般情況是讓目標(biāo)產(chǎn)品結(jié)合在柱子上，用平衡液洗去雜質(zhì)，再選擇一種洗脫液洗下目標(biāo)產(chǎn)品。

（3）介質(zhì)對樣品組分吸附的程度取決于樣品的疏水性質(zhì)、流動相的離子強(qiáng)度和溫度。鹽濃度大、溫度高或樣品組分疏水性強(qiáng)，介質(zhì)對組分吸附牢。

7.4洗脫

疏水介質(zhì)可用減小鹽濃度進(jìn)行洗脫。加表面活性劑或有機(jī)溶劑可加強(qiáng)洗脫。最常用的洗脫液是低鹽濃度緩沖液，如0.02~0.05mol/L的PBS。

7.5再生

一般用低鹽濃度的緩沖液洗，洗10倍以上柱體積，接著用結(jié)合蛋白的平衡液洗到平衡，可再次使用。

若有失活蛋白質(zhì)或脂類物質(zhì)在再生時洗不掉，可用在位清洗（CIP）除去。

7.6在位清洗

（1）對于以離子鍵結(jié)合上去的蛋白，可以用2M Nacl去除。

（2）對沉淀蛋白、對以疏水性結(jié)合的蛋白或脂類，可用1M NaOH 去除。

（3）對強(qiáng)疏水性結(jié)合的蛋白、脂類等，用4~10倍柱體積的70%乙醇或30%異丙醇清洗，但要注意有機(jī)溶劑的濃度以梯度的方式逐漸增加，否則容易產(chǎn)生氣泡。

清洗完畢后，用至少3倍緩沖液平衡柱子。

7.7注意

在裝柱、使用和保存柱子的時候，要避免柱子流干，氣泡進(jìn)入。

7.8去熱源

用0.5M的氫氧化鈉清洗柱子5~6小時或用0.1M的氫氧化鈉24小時?；蛴靡韵路椒ú襟E去除：

（1）2倍柱體積的70%乙醇；

（2）2倍柱體積50mM Tris-Hcl pH7.5；

（3）1倍柱體積4M尿素；

（4）3倍柱體積的Tris緩沖液+0.1M Nacl；

上緩沖液都在無熱源的雙蒸水中配制。

7.9消毒用0.5~1M NaOH室溫下洗8~10倍柱體積，初始緩沖液平衡柱子。

特別注意：

上樣之前，樣品必須去除色素，否則色素會被吸附到填料上，影響填料的正常使用。

備注：產(chǎn)品信息可能會有優(yōu)化升級。請以實際標(biāo)簽信息為準(zhǔn)。

苯基-瓊脂糖凝膠H.P.

苯基-瓊脂糖凝膠H.P.